1.融化

將培養基放到沸水浴中或采用其他有相同效果的方法(如高壓鍋中的蒸汽)融化。經過高壓滅菌后盡量減少重新加熱的時間,避免過度加熱。融化后立即移開,室溫靜置片刻(約2min），以免玻璃容器發生破裂。  

融化后的培養基放入47℃~50℃恒溫水浴鍋中保溫，冷卻到47℃~50℃所需的時間取決于其類型、體積和在水鍋里的分裝量。融化后應盡快使用，放置時間一般不超過4h。剩余的化學限定培養基固后不得再次融化使用。特別是靈敏性的，應根據相關標準，縮短融化后放置的時間。  

將其倒入類似檢測培養使用的獨立容器中,插入溫度計,記錄并保存瓊脂的融化溫度。  

加入樣品的培養基應將溫度調節到44℃~47℃，或按照相關標準調節溫度。  

2.脫氣

必要時，在使用前將養基放到沸水浴或蒸汽浴中加熱15min,加熱時松開容器蓋子；加熱后蓋緊蓋子，并迅速冷卻至使用溫度。  

3.添加成分的加入

對熱不穩定的添加成分應在培養基冷卻至47℃~50℃時加入,滅菌的添加成分加入前應冷卻至室溫,避免冷的液體會造成瓊脂凝膠或形成片狀物。將添加成分慢加入并充分混勻，盡快分裝到待用的容器中。  

4.棄置

所有污染和未使用的化學限定培養基的棄置應采用安全的方式,并符合相關法律法規的規定。