細胞污染是生物實驗室中常見的問題之一，輕則引起細胞狀態改變，降低實驗結果的可重復性，重則會直接導致細胞的死亡，影響實驗進度。本期內容，我們匯總了支原體污染的癥狀，并分別給出了應對方法。

一、生物污染

細胞的體外生存環境，可以說是“危機四伏"。空氣中漂浮著各種肉眼難以捕捉的微生物，稍有不慎，細胞就會被感染。不僅如此，如果實驗操作不夠規范，還有可能出現細胞交叉污染的情況。

1、支原體污染

支原體（mycoplasma）是一類沒有細胞壁、高度多形性、部分可用人工培養基培養增殖的原核細胞型微生物，大小為0.3微米左右。由于能形成絲狀與分枝形狀，故稱為支原體。在細胞培養過程中，顯微鏡很難捕捉到它們的身影，與細胞競爭營養，影響細胞生長，最終導致實驗出現偏差。

支原體的培養條件，與細胞培養條件高度重合，因此，支原體會與細胞共同競爭有限的生存資源。早有研究表明，一些支原體（包括最為常見的人型支原體、發酵支原體、精氨酸支原體等），通過精氨酸脫亞胺酶分解精氨酸來供能。當這些支原體混入細胞培養體系后，會與細胞爭搶精氨酸，導致細胞“吃不飽飯"，出現營養不良的癥狀：生長速率異常、活力下降、易脫壁等。而精氨酸又是細胞組蛋白的重要組成成分，缺乏精氨酸會嚴重影響組蛋白合成，引起染色體斷裂。再加上細胞處于長期饑餓的狀態，最終導致細胞生長變慢甚至死亡。

支原體通過黏附作用與細胞結合，獲取細胞膜表面的脂質和膽固醇，破壞細胞膜的完整性，同時影響細胞間的信號傳遞。支原體會趁機侵入細胞，增加細胞中核酸內切酶的含量[2]，導致細胞染色體異常進而死亡。經過支原體的這一番操作，細胞結構已經被嚴重破壞，隨之而來的就是細胞形態改變、細胞易聚團、大面積細胞凋亡制造的蛋白碎片（也就是培養基中的碎片和小黑點）

正常情況下，培養基中養分會逐漸耗盡，細胞代謝廢物會逐漸累積，上清液會變成黃色，因此要定期更換培養基。支原體也是如此——當培養體系中感染了支原體并大量繁殖的時候，會向外排放代謝產物，影響體系中的PH，加快培養基變黃的速度。

綜上所述，如果你培養的細胞出現以下情況，基本可以確定是支原體感染了，可配合支原體檢測試劑盒（Venor®Gem OneStep，貨號：11-8025）進一步確認。

如果細胞被支原體污染，該如何處理？對于一些重要程度相對較低的細胞而言，祛除支原體成分較高，因此，此類被污染的培養物建議直接丟棄。

對于無法長期培養的珍貴樣本或病毒收獲液，則推薦使用德國MB公司的Mynox® （貨號：10-0200）。含有來自枯草桿菌提取物，可特異性地與支原體膜結合，改變支原體膜通透性，從而使支原體在2-3小時內破潰死亡。

若是可以培養超過一個月的細胞，則推薦使用德國MB公司的Mynox® Gold（貨號：10-0201），直接殺除+鞏固防護兩步處理，祛除支原體的同時，可進一步在后續培養中鞏固清除效果，防止支原體“卷土重來"。

 細胞已發生支原體污染，但又不愿丟棄，希望繼續培養：如已轉染或大量擴增的細胞的情況。復合抗生素成分，抑制支原體蛋白和DNA合成，也抑制細菌和真菌。先使用廠家推薦的“懸浮沖洗法"處理好細胞，再使用加了Zell Shield®（貨號：13-0050）的培養基養細胞，能達到更好的祛除支原體的效果。

與此同時，還應對細胞間進行消殺。使用專業的支原體祛除試劑，更加高效、安全和便捷。實驗空間中的墻壁、實驗臺、桌椅板凳、顯微鏡、冰箱、離心機等設備和儀器，可使用Mycoplasma-off™或Mycoplasma-off™ Wipes對其進行噴涂或擦拭，清除表面的多種微生物污染。對于水浴鍋、培養箱水槽等環境，可以選擇Water Shield™對其進行處理。講產品按比例直接加入水浴鍋或培養箱水槽中，可預防微生物污染。