原代細胞培養是細胞實驗中較為重要的一環，同時該實驗也具有一定的難度，需要掌握一些小技巧，才能更快上手、更好操作、更不容易“翻車”，今天我們就來一起總結一下，原代細胞培養，都有哪些注意事項。

常見的原代細胞類型

上皮細胞、內皮細胞、成纖維細胞、角質形成細胞、黑色素細胞、神經元、星形膠質細胞、肝細胞、骨骼肌細胞、平滑肌細胞、成骨細胞、肌細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、滑膜細胞、毛細胞、血細胞、干細胞。

原代細胞的優缺點

 

原代細胞VS細胞系

能夠培養的細胞系，已經獲得了通過隨機突變或通過修飾（例如癌癥基因的人工表達）轉化的癌細胞系中的無限增殖（永生化）的能力。連續細胞系通常比原代細胞更堅固，更易于操作。它們具有無限的增長潛力，是獲取基本信息的快速簡便方法。使用連續細胞系的一些缺點是它們是經過基因修飾/轉化的，可以改變生理特性并且不代表體內狀態，并且隨著時間的流逝，這可能會進一步改變。

而原代培養得來的細胞不具備無限分裂的能力，但可以相對更好地還原生物體內細胞生長狀況。

 

倍增和代數有什么區別？

倍增是培養物中細胞總數的翻倍，通常是指細胞指數或對數生長期。代數是指細胞群從培養瓶中移出，傳代培養過程的次數，傳代培養的目的，是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。

原代細胞培養過程中可能存在的錯誤

污染：轉移主要組織進行培養時需要注意避免污染。

pH值變化：這可能是由于培養基中的鹽分不正確，細菌或真菌污染，碳酸氫鹽緩沖液不足，二氧化碳張力不正確等引起的。

粘附性不足（細胞不貼壁）：培養基中不含附著因子（attachment factors）或附著因子不足，培養皿或培養基污染，細胞被胰蛋白酶過度消化等。

生長緩慢：原因包括培養基的pH值變化，必需的促進生長的成分/因子耗盡，低污染，試劑儲藏不當等。

細胞死亡：溫度波動，二氧化碳含量過低，在融化和/或冷凍保存過程中細胞受損，有毒代謝產物濃度增加，培養基中的滲透壓失衡導致細胞存活率降低。

沉淀（pH不變）：由于使用了冷凍培養基，在pH不變的培養基中可能會出現沉淀，殘留的磷酸鹽殘留在用洗滌劑洗滌時可能會沉淀出粉末狀的培養基成分。

細胞結塊（細胞不貼壁且結塊）：懸浮細胞可能由于鈣、鎂離子的存在或細胞裂解及DNA釋放（過度用蛋白水解酶消化）而結塊。

誘導變異性：多種試劑和培養基會誘導原代細胞的數據產生變異，研究者的處理手法也可能導致原代細胞的數據產生變異。

血清在細胞培養過程中的重要性不言而喻：

• 提供對維持細胞指數生長的激素，基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。

• 提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調節它們所結合的物質活力。

• 有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合，起到解毒作用。

• 是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。

• 起酸堿度緩沖液作用。

• 提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害。

• 參與細胞凍存。

• ......

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