實驗方法原理

二倍體細(xì)胞來源體內(nèi)二倍體細(xì)胞，也即正常細(xì)胞的初代培養(yǎng)。初代培養(yǎng)細(xì)胞成功后能始終保持二倍體細(xì)胞性狀，便成為二倍體細(xì)胞培養(yǎng)。
二倍體細(xì)胞雖不難培養(yǎng)，但欲求長期呈旺盛地增殖生長、并保持二倍體細(xì)胞性狀，亦非易事。為此必須采取一些有效的措施，一是低溫凍存，二是妥善的培養(yǎng)方法。
用反復(fù)傳代的方法以求獲得大量細(xì)胞和維持細(xì)胞長期生存的辦法是不妥的。因在反復(fù)傳代中，難免由于培養(yǎng)條件的變化和其它不利影響，使細(xì)胞生物學(xué)性狀發(fā)生變化。隨時間延長不僅能導(dǎo)致細(xì)胞停止生長，并可失掉二倍體性狀或發(fā)生轉(zhuǎn)化。

實驗步驟

二倍體細(xì)胞培養(yǎng)方法與一般培養(yǎng)相同，關(guān)鍵在于傳代，其傳代程序為

1. 吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中；

2. 用BSS沖洗1 次；

3. 用0.25%胰蛋白酶消化，加入消化液量以僅覆蓋住細(xì)胞層即可；作用1~5 分鐘；

4. 待細(xì)胞附著松動、細(xì)胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大，便終止消化；為防止細(xì)胞丟失可不必再用BSS沖洗，直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1）新舊混合；

5. 輕輕反復(fù)吹打制成單個細(xì)胞懸液（消化不足或吹打不充分，易形成細(xì)胞團(tuán)，不利于生長，應(yīng)注意避免）；

6. 按一分為二比例接種培養(yǎng)。

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